Процедура определения группы крови и резус-фактора

Методика определения группы крови с помощью цоликлонов

Цоликлоны – это моноклинальные антитела, полученные путем генной инженерии из крови стерильных мышей и применяемые для определения группы крови системы АВО.

В отличие от стандартных сывороток, цоликлоны отличаются очень высокой активностью и авидностью, то есть временем наступления и выраженностью реакции агглютинации (склеивания).

Цоликлоны имеют ряд преимуществ перед стандартными сыворотками

На планшет наносят большую каплю реагента анти-D-супер. Рядом – маленькую (в 10 раз меньше) исследуемой крови, которую смешивают с реагентом и оценивают результат.

Многочисленными исследованиями было показано, что в крови могут находиться различные белки (агглютиногены и агглютинины), комбинацией (наличием или отсутствием) которых и образуются четыре группы крови.

Если этим лицам провести повтор­ное переливание крови, содержащей этот фактор, то воз­никнет тяжелое осложнение, называемое резус-конфлик­том, и разовьется шок.

Звезда жизни

Поэтому в настоящее время всем больным обязательно проводят определение резус-фак­тора, так как реципиенту с отрицательным резус-фактором можно переливать только резус-отрицательную кровь.

Разработан ряд других способов определения резус-фактора, в частности с помощью универсального антирезусного реагента D.

Обязательно определение группы крови и резус-принадлежности всем больным, находящимся в стационаре. Результаты исследования должны быть зане­сены в паспорт больного.

Экспресс-диагностика (первичное определение группы крови и Rh-фактора) не учитывает антигены Келл, не говоря уже про другие системы верификации. Поэтому цоликлоны применяют только для первичного определения группы крови и резус-фактора и при экстренных показаниях трансфузии компонентов крови.

Что требуется для определения группы крови и резус-фактора?

– раствор натрия хлорида 0,9 %; специальный планшет; стерильные палочки.

Нанести цоликлоны анти-А , анти-В на специальный планшет по одной большой капле (0,1 мл), под соответствующими надписями.

Рядом с ними капнуть исследуемую кровь (0,01–0,03 мл) по одной маленькой капле. Перемешать их и наблюдать за наступлением или отсутствием реакции агглютинации в течение 3 мин.

Различают цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ. Они представляют собой моноклональные антитела, которые продуцируются двумя мыши­ными гибридомами, принадлежат к иммуноглобулинам класса М и предна­значены для определения группы крови человека по системе AB0.

Цоликлоны изготавливаются из асцитической жидкости мышей — носителей анти-А и анти-В гибридом, являются строго специфичными и, следователь­но, не могут вызывать неспецифическую агглютинацию эритроцитов.

Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти- А и анти-В антител. Цоликлоны выпускают в жидкой форме во флаконах по 5-10 мл. Цоликлоны анти-А подкрашены в красный цвет, анти-В — в си­ний, анти-АВ не подкрашивают, он остается бесцветным.

Срок хранения цоликлонов при температуре 2-8°С составляет два года, вскрытый флакон может храниться при той же температуре в течение одного месяца в за­крытом виде.

Условия определения группы крови цоликлонами аналогичны опи­санным выше способам. На пластинку индивидуальными пипетками, под соответствующими надписями, наносят по одной большой капле (0,1 мл) цоликлонов анти-А, анти-В и анти-АВ.

Рядом с каплями размещают по од­ной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл). Затем проводят смешивание капель отдельными палочками. Наблюдают за ходом реакции в течение трех минут, хотя агглютинация может появиться через три — шесть секунд, но возможна и поздняя реакция агглютинации, при наличии в эритроцитах слабых антигенов А или В.

Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных комочков, быстро сливающихся в крупные хлопья.

Интерпретация результатов реакции агглютинации крови с цоликлонами представлена в таблице 5.

Таблица 5. Определение группы крови с помощью цоликлонов
Результат реакции с цоликлонами Исследуемая кровь принадлежит к группе
Анти-А Анти-В Анти-АВ
0(I)
A(II)
B(III)
AB(IV)

1. Отсутствие агглютинации во всех каплях свидетельствует о том, что в исследуемых эритроцитах нет агглютиногенов А и В, и исследуемая кровь принадлежит к 0(I) группе.

2. Наличие агглютинации в каплях с анти-А и анти-АВ свидетельствует о том, что в исследуемых эритроцитах имеется антиген А и кровь принадлежит к A(II) группе.

3. Наличие агглютинации в каплях с анти-В и анти-АВ свидетельствует о том, что в исследуемых эритроцитах имеется антиген В и кровь принадлежит к В (III) группе.

4. Наличие агглютинации во всех каплях свидетельствует о том, что в исследуемых эритроцитах имеются оба антигена (А и В) и кровь при­надлежит к АВ(IV) группе.

10) и, отдельно, проверяется реакция с сывороткой четвер­той группы крови. При отсутствии агглютинации эритроцитов в фи­зиологическом растворе и в сыворотке четвертой группы можно ут­верждать, что исследуемая кровь принадлежит к АВ(IV) группе.

Про­водить отдельно контроль с растворителем цоликлонов не требуется, поскольку в нем нет каких-либо добавок, способных вызвать агглю­тинацию эритроцитов.

Определение данным методом производится в лабораторных условиях. Температура воздуха должна находиться в пределах 15 – 25 градусов по Цельсию. Исследование должно проводиться при достаточно хорошем освещении.

Анализ проводится на белой тарелке или планшете с хорошо смачиваемой поверхностью. Благодаря высокой активности и авидности цоликлонов, есть возможно применение по серии реагентов анти-A и анти-B.

Определение групп крови
Определение групп крови

Возле моноклональных антител капают по одной капле крови, смешивают ее уголком предметного стекла или стеклянной палочкой с реагентами. Перед дальнейшим смешиванием пар капель необходимо тщательно промыть и насухо вытереть стекло или палочку.

Агглютинаты достаточно хорошо видны даже невооруженным глазом, быстро сливаясь и образуя большие хлопья. В случае, если не происходит склеивания, капля реагента приобретает равномерную окраску красного цвета.

Для проведения процедуры применяется только венозная кровь. Направление на процедуру выдает врач-гематолог. Действие препарата ожидается в течение нескольких минут.

Резус-фактор определяется тем же эффективным способом, но с применением другого реагента

Для определения резус-фактора нужно провести такую процедуру:

  • каплю крови смешивают с моноклональным реагентом;
  • слабый эффект агглютинации отмечается уже через 10-15 секунд;
  • полное склеивание возможно только через минуту.

Реакция агглютинации показывает, есть ли резус-фактор . При положительной крови агглютинация наступает всегда. Если этот процесс не развивается, резус отрицательный.

Итак, мы рассмотрели определение группы крови и резус-фактора цоликлонами (алгоритм процедуры). Применение данного способа широко распространено в медицинских учреждениях разных стран.

Следует также отметить важность резус – фактора в гинекологическом обследовании. Определение резус фактора у беременной женщины является обязательной процедурой.

Определение резус фактора у беременной женщины

Как проводится

Определение группы крови данным методом проводится в лаборатории. Температура воздуха в помещении должна составлять от 15 до 25 градусов C. Исследование должно проходить при хорошем освещении.

Все реагенты нужно хранить плотно закрытыми, поскольку при высыхании активность антител значительно снижается. Нельзя использовать мутные и содержащие хлопья реагенты.

Для каждого из них нужна отдельная пипетка. Процедура проводится на планшете или тарелке белого цвета, поверхность которых должна хорошо смачиваться.

На планшете делают надписи: анти-A и анти-B. Под соответствующие надписи капают цоликлоны в количестве примерно 0,1 мл. Реагент анти-A имеет желтовато-розовый цвет, анти-B – синий.

Рядом с моноклональными антителами капают по капле крови и смешивают ее с реагентами стеклянной палочкой или уголком предметного стекла. Перед смешиванием следующей пары капель палочку или стекло тщательно промывают и вытирают насухо.

На протяжении 2,5 минут ведут наблюдение за агглютинацией, при этом планшет слегка покачивают. Затем оценивают результат. Надо сказать, что для наблюдения за процессом не требуются никакие приспособления.

Агглютинаты хорошо видны невооруженным глазом, они быстро сливаются и образуют большие хлопья. Если склеивания не происходит, капля реагента равномерно окрашивается в красный цвет.

  1. Если агглютинация отсутствует (и с цоликлоном анти-A, и с анти-B), в эритроцитах нет ни антигена A, ни B. Это I группа.
  2. Если агглютинация есть лишь с цоликлоном анти-A, в эритроцитах содержится только антиген A. Это кровь II группы.
  3. Если агглютинация наблюдается лишь с цоликлоном анти-B, в красных клетках есть только антиген B. Это III группа.
  4. Если агглютинация произошла c цоликлоном и анти-A, и анти-B, в эритроцитах есть оба антигена. Для исключения аутоагглютинации проводят контрольную процедуру: смешивают изотонический раствор натрия хлорида (0,1 мл) и исследуемую кровь (0,01 мл). Если агглютинация отсутствует, то это IV группа.

Расшифровка полученных данных

Если происходит трансфузия резус-позитивной донорской крови резус-негативному реципиенту, возникает резус-столкновение. Иммунная система организма реципиента начинает продуцировать антитела к резус-положительным эритроцитам, они разрушаются.

Такое явление получило название «гемолиз». Поэтому, при гемотрансфузии необходимо, чтобы кровь отдающего и принимающего совпадала по группе и по резусу.

Историческая справка

Особую опасность представляет резус-конфликт крови во время беременности резус-негативных матерей. Если у резус–негативной матери формируется резус-позитивный плод, иммунная система вырабатывает антитела в крови к эритроцитам эмбриона и разрушает их.

Плод, в таком случае, погибает. Риск такого развития событий наиболее вероятен при второй и последующих беременностях. Разработаны методы предохранения от резус-конфликта Rh- матери и Rh плода, позволяющие сохранить жизнь и здоровье будущего ребёнка.

Когда необходим анализ
При беременности очень важно знать резус фактор крови

Таблица сопоставления группы крови и цоликлона позволяет разобраться в результатах.

Цоликлон I положительная I отрицательная II положительная II отрицательная III положительная III отрицательная IV положительная IV отрицательная
Анти-А
Анти-В
Анти-D
  1. Если отсутствует агглютинация (с анти-A и анти-B), эритроциты не содержат антигенов A и Б. Это I группа крови;
  2. Если есть агглютинация только с анти-A, эритроциты содержат лишь антиген A, что характеризует II группу крови;
  3. Если агглютинация только с анти-B, красные клетки содержат антиген B, что характеризует III группу;
  4. Если наблюдается агглютинация c обоими цоликлонамми анти-A и анти-B, эритроциты содержат оба антигена. С целью исключения аутоагглютинации необходимо провести контрольную процедуру: в этом случае смешивают 0,1 миллилитр изотонического раствора хлорида натрия и 0,01 миллилитр исследуемой крови. Если реакция агглютинации отсутствует, определяется IV группа.

Иногда возможно получение недостоверных, ложных результатов. К примеру, если при добавлении к препарату крови изменился их цвет или если агглютинация наблюдается во всех ячейках планшетки.

Обязательно нужно соблюдать и все условия правильного проведения процедуры.

Если инструкция к препарату содержит указания и касательно требуемой влажности, следует учитывать и данный фактор.

Определение группы цоликлонами постепенно приобретает все большую популярность. Если раньше эта процедура проводилась исключительно в специализированных стационарах (к примеру, только в отделениях гематологии и хирургии), то сейчас процедура доступна почти в любой достаточно оборудованной лаборатории.

На платной основе проведение этой услуги предлагают и многие центры косметологии и частной медицины. Бесплатно данная процедура, как было сказано выше, проводится по направлению терапевта или лечащего врача.

Наверняка каждый хотя бы раз в жизни сталкивался с анализом на определение группы крови. О том какие существуют способы определения группы крови и каким из них лучше всего проводить тест на принадлежность к тому или иному виду – тема сегодняшней статьи.

В современной гематологии, под группой крови понимают специфический набор антигенов, расположенных на поверхности эритроцитов, определяющий их специфичность.

Данных антигенов существует огромное количество (обычно, используется таблица групп со всевозможными антигенами), однако, во всем мире признана классификация крови по системе АВ0 и резус-фактору.

Группа крови обязательно определяется при подготовке к любым операциям. В число обязательных контингентов, в которых проводится определение группы крови, входят военные, работники силовых структур и внутренних органов.

Данное мероприятие необходимо, так как в случае развития ургентного состояния (угрожающего жизни) может возникнуть необходимость в переливании, когда не будет времени проводить анализ и тест на ее совместимость с донорской.

Цоликлоны

Любому человеку необходимо знать свою группу крови и резус-фактор. Это возможно внезапно пригодиться при чрезвычайных ситуациях. Известно, что для всех военнослужащих обязательно указание этих параметров на форме или жетонах.

Однако и маленькие деревенские поликлиники оснащены стандартным лабораторным комплексом для проведения теста. На данный момент существует немалое количество методов определения группы крови и резус-фактора.

Определение группы крови ребенка по группе крови родителей довольно распространенный метод получения данных. Например, если у матери или отца вторая, третья либо четвертая, группа крови их ребенка никогда не будет первой.

Техника определения группы крови с помощью цоликлонов считается достоверной, и результат можно получить в кратчайший срок. Таблица прохождения агглютинации позволяет понять, как правильно расшифровать полученную в процессе процедуры информацию.

Если ни с одним из используемых в процессе процедуры реагентов агглютинация не произошла, для анализа была получена кровь первой группы, в которой нет антигенов А или В.

Если в процессе смешивания исследуемой массы с цоликлонами анти-А произошло склеивание, речь идет о второй группе крови, в которой содержатся антигены А.

Метод цоликлонов

Склеивание цоликлонов анти-В с компонентами крови при смешивании их с кровью пациента свидетельствует о том, что для процедуры сдана кровь третьей группы, в которой содержатся антигены В.

Если произошла агглютинация фрагментов крови с обоими видами реагентов, скорее всего, манипуляция проводится с участием четвертой группы. Для подтверждения данного предположения применяется специальный цоликлон анти-АВ.

В заключение

Моноклональные реагенты для определения группы крови имеют явные преимущества по сравнению со стандартными изогем-агглютинирующими сыворотками. Они обеспечивают очень точный результат, а сама процедура безболезненна, безопасна и занимает очень мало времени.

Студентка медколледжа — 18 июня,:34

Очень благодарна за полезный и интересный сайт и статью в частности!

Гость — 31 января,:56

Стандартный метод

Какие возможные ошибки в определении резус-фактора цоликлонами, если сначала определили резус ( ), а затем резус (-)?

Препараты цоликлонов

Выделяют эритротест-цоликлон анти-D.

Существуют три разновидности:

  • анти-D-цоликлонОбычный анти-D-цоликлон. При его добавлении развивается реакция непрямой агглютинации;
  • Супер. Вызывает прямую агглютинацию;
  • Препарат анти-D-микс, имеющий в составе компоненты обычного и супер цоликлона анти-D). С их помощью можно как выявить группу крови, так и определить резус-принадлежность крови.

Отличие других растворов состоит в названии, поскольку входящие в их состав антитела – иммуноглобулины М и G – предоставляют возможность только произвести типизацию крови по антигенам АВ0.

Способы определения группы крови

• с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток;

• с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов (перекрёстный способ);

• с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

При необходимости определения группы крови в экстренном порядке (при кровотечении необходимо срочное переливание крови) врач стационара определяет группу крови сам (в лаборатории перепроверку выполняют, но постфактум).

Метод определения цоликлонами

Суть метода в обнаружении в исследуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для этого используют реакцию агглютинации.

Методика проведения реакции

1. Перед началом реакции подписывают тарелку (наносят фамилию и инициалы исследуемого), после чего на неё под соответствующие обозначения наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворотки I, II и III групп в объёме 0,1 мл (капля около 1 см в диаметре).

Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп, так как одна из серий может иметь низкую активность и не дать чёткой агглютинации. Всего получается шесть капель, образующих два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: 0(1), А(11), B(III).

2. Кровь для исследования берут из пальца или из вены. Шесть капель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку (0,01 мл, маленькая капля) последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на пластину в шесть точек, каждую — рядом с каплей стандартной сыворотки (количество исследуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой её смешивают), потом их осторожно с помощью стеклянных палочек с закруглёнными краями перемешивают.

3. После смешивания тарелку периодически покачивают.

Агглютинация начинается в течение первых 10—30 с, наблюдение следует обязательно вести до 5 мин ввиду возможности более поздней агглютинации, например с эритроцитами группы А2(2).

4. В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результат реакции.

Реакция агглютинации может быть положительной или отрицательной. При положительной реакции обычно в течение первых 10— 30 с в смеси появляются видимые невооружённым взглядом мелкие красные зёрнышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов.

Мелкие зёрнышки постепенно сливаются в более крупные зёрна, а иногда в хлопья неправильной формы. При этом сыворотка частично или полностью обесцвечивается. Положительная реакция может быть пескообразной или лепестковой.

Определение резус-фактораАнтигенная система резус-фактора

В 1940 г К. Ландштейнер и А. Винер обнаружили в эритроцитах человека совершенно новый антиген, названный ими резус-фактором (Rh). Резус-фактор присутствует в крови 85% людей, а у 15% отсутствует.

Система антигенов резус представлена пятью основными антигенами: D, С, с, Е, е (ранее считали, что их шесть, но позже было доказано, что аллельного гена d не существует).

Наиболее активен из всех антигенов Rh0 (D) — резус-фактор. В зависимости от его наличия или отсутствия кровь людей делят на резус-положительную (Rh ) и резус-отрицательную (Rh-).

Способы определения резус-фактора

Все методы определения резус-фактора делят на способы, применяемые в клинической практике, и лабораторные способы.

Способы определения Rho(D) в клинической практике

Методика проведения реакции. Исследование проводят в центрифужных пробирках объёмом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой антирезусную сыворотку группы AB(IV), разведённую 33% раствором декстрана затем в нее добавляют одну каплю исследуемой крови (или эритроцитов).

Круговым вращением пробирки содержимое размазывают по её внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает её крупнолепестковой.

Агглютинация на стенках пробирки наступаетв течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса антиген-антитело и чёткой агглютинации наблюдать не менее 3 мин.

Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2—3 мл физиологического раствора и перемешивают путём однодвукратного перевертывания пробирки (без взбалтывания!).

Наличие агглютинации (крупные хлопья на фоне просветлённой жидкости) указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови

подвергаются агглютинации только эритроциты переливаемой донорской крови, так как агглютинины вливаемой крови разводятся в сосудистом русле пациента, их титр становится низким и они не в состоянии агглютинировать эритроциты реципиента.

Правило Оттенберга применимо лишь при переливании до 0,5 л донорской крови (!).

Стандартный метод

Существует множество различных техник, но в клинических лабораториях чаще всего используют методику стандартных сывороток. Как определить группу крови по стандартным сывороткам?

Этот метод применяется для определения антигенов системы АВ0. Стандартная изогемагглютинирующая сыворотка имеет в своем составе набор специфических антител к поверхностным молекулам эритроцитов.

При наличии антигена, на которое распространяется действие антител, происходит образования комплекса антиген-антитело, что провоцирует запуск каскада иммунных реакций.

Ее результат — агглютинация эритроцитов, на основании характера агглютинации судят можно сделать заключение об отнесении образца к той или иной группе крови.

Стандартные сыворотки готовят из донорской крови по определенной системе — путем выделения плазмы с присутствующими в ней антителами и ее последующего разведения. Разведение проводят с помощью изотонического раствора натрия хлорида.

Разведение проводится следующим образом – в пробирку с 1 мл 0.9 процентного раствора пищевой соли добавляют 1 мл плазмы и тщательно перемешивают раствор.

После, пипеткой отбирают 1 мл полученного раствора плазмы и добавляют его во вторую пробирку, содержащую изотонический раствор. Таким образом, достигается разведение плазмы в соотношении 1:256.

Техника проведения исследования следующая – на специальный планшет для определения группы крови помещают по одной капле (общим объемом около 0.1 мл) каждой сыворотки в область с соответствующей пометкой (используются сыворотки двух образцов, среди которых один является контрольным, а второй используется для исследования).

После этого, возле каждой капли сыворотки помещают исследуемый образец (0.01 мл), после чего он по отдельности смешивается с каждым видом диагностикума.

Через некоторое время (в среднем, около 5 минут) проводят анализ полученных результатов с описанием характера произошедшей реакции:

  • если в исследуемом образце происходит агглютинация – тест положительный;
  • если агглютинации нет, то реакция отрицательна.

Проще говоря, наличие агглютинации говорит о том, что в крови имеется необходимый набор агглютиногенов, и если она произошла, значит кровь принадлежит к той группе, антитела к которой содержатся в сыворотке.

Для осуществления типового анализа на определение группы крови с помощью стандартных сывороток, которые содержат определенные антигены, также необходимы эритроциты человека (берутся при заборе крови из пальца).

Определение групп крови стандартными сыворотками

Сыворотки заготавливаются из плазмы донора крови на станциях переливания и имеют срок хранения. Обязательным требованием являются условия хранения лабораторного материала.

На ампулах обязательно обозначается серийный номер. Для точности данного метода необходимы сыворотки нескольких серий, во избежание неточного результата анализа.

Алгоритм проведения анализа на определение групп крови следующий:

  • Для проведения анализа данным методом необходимы большие капли четырех типов сывороток (достаточно только третьей и второй, но для точности результата требуется еще первая и четвертая).
  • В сыворотку добавляют исследуемую кровь и перемешивают (пропорция приблизительно 1:10). Пять минут образцы крови и сыворотки аккуратно смешивают.

По истечении пяти минут, можно получить результаты анализа крови. В крупных частичках сыворотки происходит осветление, в одних появляются маленькие хлопья (реакция свертывания и выпадения в осадок), в других этого не происходит.

Варианты и расшифровка анализа на выявление группы крови могут быть следующие:

  • агглютинации отсутствует в обеих пробах сывороток третьего и второго типов ( дополнительные первая и четвертая) — это первый тип крови;
  • свертывание происходит во всех, за исключением второй — это говорит о 2 группе крови;
  • если агглютинация отсутствует только с третьим типом сыворотки — это 3 группа крови;
  • если же свертываемость происходит во всех образцах — это 4 группа крови.

В случае, когда данные сыворотки представлены в правильном порядке, на пробах обозначены подписи, то определиться с результатом исследования легко: если отсутствует свертывание, то тип крови установлен автоматически.

Могут возникнуть ситуации, когда видимость склеивания нечеткая.

В этом случае исследование крови проводится второй раз, мелкие реакции склеивания и выпадения в осадок наблюдают под микроскопом.

  1. Подписать тарелку (Ф.И.О. пациента);
  2. Нанести обозначения двух серий стандартных сывороток I, II и III групп крови в объёме 0,1 мл, образующие два ряда по три капли слева направо: 0 (I), А (II), В (III);
  3. Забрать кровь из вены. Шесть капель исследуемой крови пациента перенести стеклянной палочкой на пластину в шесть точек рядом с каплей стандартной сыворотки и перемешать.

Агглютинация начнется через 30 сек. В те капли, где произошла агглютинация, добавить по одной капле NaCl 0,9% и оценить результат.

Положительная реакция агглютинации может быть пескообразной или лепестковой. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет.

Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы (двух серий) должны совпадать. Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками после наблюдения в течение 5 мин.

При этом следует отметить, что если сыворотки всех трёх групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена (А и В) и принадлежит к группе AB (IV).

Однако в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB (IV), не содержащей агглютининов.

Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0 (I), А (II) и В (III), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ (IV).

Для реакции со стандартными эритроцитами необходимы стандартные эритроциты трёх групп крови: 0 (I), А (II), B (III).

  1. Кровь для исследования берут из вены в пробирку, центрифугируют или оставляют на 30 мин для получения сыворотки.
  2. На маркированную тарелку наносят три больших капли (0,1 мл) сыворотки крови из пробирки, а рядом с ними по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп.
  3. Соответствующие капли смешивают стеклянными палочками, планшет покачивают, наблюдают в течение 5 мин, в капли с агглютинацией добавляют NaCl 0,9% и оценивают результат.

Метод перекрестной реакции

Данная техника заключается в определении агглютиногенов с помощью цоликлонов или стандартных сывороток с параллельным выявлением агглютининов при помощи эталонных эритроцитов.

Методика проведения практически не отличается от определения группы крови при помощи сывороток, однако, есть некоторые дополнения.

На планшетку ниже нанесенных сывороток добавляют по одной малой капле стандартных эритроцитов. После этого, из пробирки, содержащей прошедшую через центрифугу кровь пациента, извлекают с помощью пипетки плазму, которую добавляют к стандартным эритроцитам, а находящиеся на дне ее эритроциты вносят в стандартную сыворотку.

Также как и при методике стандартных сывороток, полученные результаты оценивают через несколько минут после начала реакции. При наличии агглютинации в стандартных сыворотках судят о наличии агглютининов системы АВ0, а при развитии реакции плазмы со стандартными эритроцитами – об имеющихся агглютиногенах.

Перекрестный метод получил широкое распространение благодаря тому, что он предотвращает основные диагностические ошибки при определении крови стандартными методиками.

Экспресс-методика

Несмотря на то, что общепринятые методики определения групповой принадлежности крови повсеместно распространены, в настоящее время широко внедряются в медицинскую и лабораторную практику экспресс-методы определения группы крови. Одним из них является “Эритротест”.

Комплект для определения группы крови “Эритротест-группокарт” состоит из следующих компонентов:

  • универсальная планшетка с пятью лунками для проведения определения группы по системе АВ0 и ее резус-принадлежности;
  • скарификатор для получения образца для исследования;
  • чистая пипетка с помощью которой проводят набор растворов;
  • стеклянные палочки, использующиеся для перемешивания образцов.

Все перечисленное оснащение необходимо для правильного проведения экспресс диагностики.

Данная методика позволяет проводить определение группы крови и резус-фактора в любых условиях, особенно если нет возможности использовать классические методы.

В лунках планшетки находятся цоликлоны к поверхностным антигенам (цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ), а также к основному антигену, обуславливающему наследование резус-фактора (цоликлон анти-D).

Для оценки полученных результатов используется специальная таблица, в которой перечислены всевозможные результаты исследования.

Данное тестирование крови дает возможность определить группу крови и ее резус фактор практически в любых домашних условиях. В экспресс-наборе имеется специальная карточка, в которой проделаны вмятины.

Главное преимущество экспресс-теста — это скорость анализа и удобство при проведении. Результат исследования известен приблизительно по истечению пяти минут.

Помимо стандартных антител, также применяется «анти-D». Он дает данные о резус- факторе пациента. Для данного анализа кровь подходит практически в любом виде. Специфические реагенты уже входят в состав экспресс-методики.

Перед переливанием или серьезным хирургическим вмешательством группа крови перепроверяется с целью абсолютной точности данных. Очень важна также индивидуальная совместимость человека, помимо групповой.

Экспресс-методика
Экспресс-тест

Определение резус-фактора цоликлонами

Открыта Ландштейнером, Винером в 1937 – 1940 гг. В настоящее время выделено много антигенов этой системы. Наиболее важными из них являются : Rhо (D); rh’ (С) ; rh» (Е).

Самым активным является антиген D.

Кровь считается резус-положительной (Rh ) если есть агглютиноген D.

У 85% европейцев кровь резус-положительная, у 15% — резус-отрицательная. У монголоидов 100% резус-положительная.

К агглютиногенам системы резус нет врожденных агглютининов. Они вырабатываются в ответ на введение агглютиногена .

1) повторное переливание резус-отрицательному реципиенту резус-положительной крови;

2)в случаях беременности, когда резус-отрицательная мать вынашивает резус-положительный плод. Попадание в кровь матери даже 0,1 – 0,45 мл Rh крови плода вызывает выработку антител (антирезус-агглютининов, Rh — антител).

Исход такой беременности зависит от титра антител.

Помимо системы АВ0 и Rh-hr существуют другие системы агглютиногенов. Они находятся в эритроцитах независимо от АВ0 и друг от друга.

1.Система Келл – Челлано

2.Система Кидд

3. Система Лютеран

4. Система Даффи

5.Система Диего (У индейцев Ю.Америки).

Все эти системы агглютиногенов имеют значение при частых переливаниях крови или при беременности, несовместимой по какому-то из этих агглютиногенов. Поэтому от одного донора нельзя переливать кровь многократно.

В основе лежит наличие или отсутствие агглютинации.

Для определения групп крови используют цоликлоны анти-А и анти В, содержащие агглютинины α и β соответственно.

При добавлении в каплю цоликлона в 10 раз меньшее количество исследуемой крови наблюдают состояние внесенных эритроцитов.

I группа крови не содержит агглютиногенов, поэтому агглютинация (склеивание эритроцитов) не происходит.

II группа крови дает агглютинацию в цоликлоне анти- А,

III в цоликлоне анти-В

IV в анти-А и анти-В

Для определения резуспринадлежности используют цоликлон анти-D. Если кровь резус-положительная наблюдается агглютинация.

Можно переливать только одногруппную кровь резуссовместимую.

1.Определить группу крови во флаконе и у реципиента;

2.Определить резус-фактор у донора и реципиента;

3.Провести пробу на индивидуальную совместимость. На стекле смешивают каплю сыворотки или плазмы реципиента и кровь донора в соотношении 10 : 1;

4.Проводят пробу на резус-совместимость. В пробирку вносят 2 капли плазмы реципиента, 1 каплю крови донора и 1 каплю 33% полиглюкина. В течение 3 мин перемешивают, затем добавляют 3 – 5 мл физраствора.

5.Проводят трехкратную биологическую пробу: 3 раза по 15 – 20 мл крови донора вливают струйно с интервалом 3 мин.

6.Остальную часть крови переливают капельно или струйно по показаниям.

1046 вузов, 2195 предметов.

29 Методы определения групп крови и резус-фактора. Профилактика возможных ошибок

Определение групп крови с помощью стандартных сывороток. В лунки планшета для определения групп крови последовательно наносят пипетками по одной крупной капле стандартной сыворотки групп 0(1), А(П), В(Ш) двух различных серий каждой группы.

Затем наносят в каждую лупку по капле исследуемой крови, в 5 — 10 раз меньшую сыворотки. Сухими стеклянными палочками или путем покачивания планшета смешивают стандартные сыворотки и исследуемую кровь. Через 5 минут оценивают результат (табл. 2).

Определение групп крови с помощью стандартных сывороток

Группа исследуемой крови

Определение групп крови по стандартным эритроцитам. В лунки планшета наносят большие капли плазмы исследуемой крови. Рядом с каждой каплей плазмы последовательно наносят по небольшой капле стандартных эритроцитов групп 0(1), А(II), В(III).

Определение групп крови с помощью стандартных эритроцитов

Определение резус-фактора. На дно сухой пробирки наносят 1 большую каплю универсального реагента анти-резус, затем добавляют такую же каплю исследуемой крови.

После встряхивания пробирки производят перемешивание сыворотки анти-резус и крови в течение 5 минут по стенкам пробирки, после чего добавляют 5 — 7 мл физиологического раствора. Наличие агглютинации свидетельствует о присутствии резус-фактора.

Определение групп крови с помощью цоликлонов. Цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками.

Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготовляются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом.

Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объемом 5 — 10 мл. Цоликлон анти-А — желтого цвета, анти-В — синего, анти-АВ — бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия.

Техника определения групп крови. Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта, в том числе из пальца.

Используется метод прямой гемагглютинации на пластине или планшете, определение производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 — 25 X.

Наносят на пластину или планшет индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.

Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 — 0,03 мл).

Смешивают кровь с реагентом, покачивая планшет.

Наблюдают за ходом реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3 — 5 секунд, но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов.

Агтлютинаты видны в виде мелких красных агретатов, быстро смешивающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Интерпретация результатов реакции агглютинации с цоликлонами представлена в табл. 4.

Определение групп крови с помощью цоликлонов

Примечание: знаком ( ) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) — се отсутствие

При положительном результате реакции агглютинации со всеми гремя цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую аглютинацию исследуемых эритроцитов.

Для этого смешивают на плоскости 1 каплю исследуемых эритроцитов с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе AB(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе.

Определение резус-фактора с помощью цоликлона. В лупку планшета наносят 1 большую каплю цоликлона анти-Д-суперт рядом наносят 1 маленькую каплю исследуемой крови.

Покачивая планшет, смешивают кровь с цоликлоном. За ходом реакции наблюдают в течение 3 минут. Наличие агглютинации свидетельствует о присутствии резус-фактора.

Узнать группу крови можно с помощью цоликлонов. Этот довольно новый метод позволяет получить практически 100% достоверный результат.

Такой вид анализа выполняется в условиях лаборатории. Для получения достоверного результата во время исследования должны быть соблюдены ряд правил. Прежде всего, температура воздуха в помещении, где проводятся анализы, не должна быть ниже 15 градусов по Цельсию и выше 25 градусов по Цельсию.

Также в лаборатории должно быть хорошее освещение. Для выполнения анализа используются только качественные реагенты. Они не должны иметь замутнения и содержать хлопья.

Для каждого реагента должна быть применена отдельная пипетка, чтобы не допустить смешивание. Помимо этого, для исследования потребуется обильно смоченная тарелка белого цвета.

Алгоритм действия в данном случае будет следующим. На двух противоположных сторонах тарелки выполняются надписи анти-А и анти-В, под которые лаборант помещает по 0,1 мл соответствующего цоликлона.

Определить их можно по оттенку. Так, у цоликлона анти-А он желто-розовый, а анти-В – синий. Далее, под реагент помещается капля крови. С помощью стеклянной палочки обе субстанции смешиваются.

Затем, ведется наблюдение за процессом агглютинации. Это должно продолжаться в течение 2,5 минут. Тарелку при этом следует слегка покачивать. Для того чтобы определить агглютинацию не нужно никакого дополнительного оборудования.

Ее определяют визуально. В том случае, если она происходит, то появляются крупные хлопья. Если же процесса агглютинации нет, то цоликлон приобретает красный цвет. После этого происходит определение группы крови:

  • Если агглютинация не идет ни с одной, ни с другой стороны тарелки, то в эритроцитах нет антигенов А и В, следовательно, кровь принадлежит к первой группе.
  • Если агглютинация происходит только там, где присутствовал цоликлон анти-А, то в форменных клетках крови (эритроцитах) присутствует лишь антиген А. Следовательно, кровь принадлежит второй группе.
  • Если агглютинация происходит только там, где присутствовал цоликлон анти-В, то в форменных клетках крови (эритроцитах) присутствует лишь антиген В. Следовательно, кровь принадлежит к третьей группе.
  • Если процесс агглютинации идет в обоих случаях, то в эритроцитах есть антигены А и В. В такой ситуации рекомендуется сделать дополнительный анализ. Для его проведения берется капля крови пациента и смешивается с изотоническим раствором хлорида натрия в количестве 0,1 мл. Если при этом агглютинация не наблюдается, то определяют четвертую группу крови.

Состав крови различных групп крови

Суть системы АВ0 состоит в наличии структур антигенов на эритроцитах. В плазме нет соответствующих им типовых антител (гамма-глобулинов). Поэтому для исследования крови можно использовать реакцию «антиген антитело».

Эритроциты склеиваются в момент встречи антигена и антитела. Подобная реакция носит название гемагглютинации. Реакция отображается в виде небольших хлопьев при проведении анализа.

Связываются антигены эритроцитов «А» с антителами «ά», а также «В» с «β» соответственно.

Выделяются следующие группы крови по составу:

  • I (0) – ά, β — поверхность эритроцитов совсем не содержит антигенов;
  • II (А) – β — на поверхности имеется антиген А и антитело β;
  • III (В) – ά — поверхность содержит В с антителом типа ά;
  • IV (АВ) – 00 — поверхность содержит оба антигена, однако не имеет антител.

Определение групп крови

Антигены есть у зародыша уже в состоянии эмбриона, а агглютинины (антитела) появляются на первом месяце жизни.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Adblock
detector